NOVIEMBRE

¡Hola de nuevo!
Hoy os voy a contar en qué consiste y cómo funciona una de las técnicas más habituales con las que se trabaja en un laboratorio de biología molecular.
Como ya recordareis, para estudiar si un gen es importante en un proceso tumoral o no, trabajamos con distintas líneas celulares, 1) unas mutadas y otras 2) no mutadas que son nuestras células control.
Anteriormente vimos que muchos de los genes que estábamos estudiando, estaban sobreexpresados en las células KRAS mutantes pero no es las células control. Probablemente, esos genes son importantes para que las células tumorales adquieran esas características pro-tumorales.
¿De qué forma podemos comprobar si un gen es realmente necesario para que una célula tumoral sobreviva?. Pues la respuesta es sencilla, vamos a inhibir ese gen y ver qué efecto produce en la célula, si detiene su crecimiento, si deja de dividirse, si se suicida por "apoptosis", si muere, etc.
Y, ¿cómo lo hacemos?. ¡Usando virus modificados!. A continuación os voy contando como ocurre todo paso a paso y acompañado de una imagen para que se entienda mejor.
Lo primero es "armar" el virus (1) con la secuencia de ADN correcta (2) para inhibir nuestro gen. El virus llegará a la célula y la infectará con esa secuencia que nosotros hemos diseñado. La secuencia de ADN entra hasta el núcleo de la célula, y comienza a producir muchas moléculas de ARN con forma de horquilla a las que llamamos shRNAs (3).
Cuando este shRNA sale del núcleo, unas moléculas lo reconocen y lo modifican, le cortan el extremo circular (4) y separan las hebras -la roja y la negra- (5). La hebra roja se transporta hasta la zona de nuestro ADN (6) donde está la secuencia específica del gen que queremos inhibir y se una a él. Una vez se ha unido la molécula de ARN -roja- a nuestro gen -negro-, la molécula verde degrada todo el complejo (7), impidiendo que nuestro gen de interés se exprese en la célula.
Y así, utilizando virus, conseguimos silenciar genes de nuestro ADN para poder estudiar su función en la célula. El mes que viene, os contaré qué hemos observado en las células tumorales KRAS mutantes cuando inhibimos esos genes clave.
¡Hasta pronto!

SHRNA PROCESSING